培养基的制备过程中，有多个细节要留意。关于培养基的正确制备。
这几点很重：
1、培养基配方的选定同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些不同。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行制造外，一般均应尽量搜集有关材料，加以比较核对，再根据自己的运用目的，加以选用，记载其来历。
2、培养基的制备记载
每次制备培养基均应有记载，包含培养基称号，配方及其来历，和各种成份的商标，毕竟pH值、消毒的温度和时刻制备的日期和制备者等，记载应拷贝一份，原记载保存备检，拷贝记载随制好的培养基一同寄存、以防发生紊乱。
3、培养基成分的称取
培养基的各种成分有必要精确称取并要留意避免紊乱，最好一次完成，不要中止。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方面军做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取结束后，即移放于右侧。彻底称取结束后，还应进行一次检查。
4、培养基各成份的混合和溶化
培养基所用化学药品均应是化学纯的。运用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好运用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或活动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。
在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能运用，应从头制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使一切成分彻底溶化，迄至煮沸。如为琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充沛混合。在加热溶化过程中，因蒸腾而丢失的水分，毕竟有必要加以补足。
5、培养基pH的开端调正
因培养基在加热消毒过程中、pH会有所改变，培养基各成分彻底溶解后，应进行pH的开端调正。例如，牛肉浸液约可降低pH0.2，而肠浸液pH却会有显着的升高。因此，对这个过程，操作者应随时留意探索经历、以期能掌握培养基的毕竟pH，确保培养基的质量。pH调整后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基堆积物的分出。
6、培养基的过滤澄清
液体培养基有必要肯定澄清，琼脂培养基也应通明无显着堆积，因此，需求采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成折扇或漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸分裂。
琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中心夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和马铃薯等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸重复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。行将冷却至55~60°C的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得逾越烧瓶容量的1/2，每1000ml培养基参加1~2个鸡蛋的蛋白，强力振摇3~5分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121°C加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。
7、培养基的分装
培养基的分装，应按运用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等恰当容器内。分装量不得超容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时最好能运用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时，分装量应以能构成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。分装容器应预先清洗洁净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应其他分装20ml培养基于一小玻璃瓶中，随该批培养基一同灭菌，以为测定该批培养基毕竟pH之用。
8、培养基的灭菌
一般培养基可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特别规定，即可用此法灭菌。
某些畏热成分，如糖类，应另行配成20%或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，往后再用无菌操作技能、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应以无菌操作技能抽取和参加于经冷却约50°C左右的培养基中。
琼脂斜面培养基应在灭菌后当即取出，冷至55℃-60℃时，摆置成恰当斜面，待其自然凝结。
9、培养基的质量测验
每批培养基制备好往后，应细心检查一遍，如发现分裂、水分浸入、色泽失常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其毕竟pH。
将悉数培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。
用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24~48小时，如无菌生长或生长欠好。应清查原因并重复接种一次，如成果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能运用。
10、培养基的保存
培养基应寄存于冷暗处，最好能放于一般冰箱内。放置时刻不宜逾越一周，倾泻的平板培养基不宜逾越3天。每批培养基均有必要附有该批培养基制备记载副页或显着标签。
