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细胞磷酸化蛋白提取有哪些方法呢?

方法:

1. 提取液制备:每500ul冷的蛋白提取液中参加2ul蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。

2.取5-10×106个细胞①,在4℃,1000rpm条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,搜集细胞。

3. 用冷PBS洗刷细胞两次,每次洗刷后尽可能吸干上清。

4. 每5×106个细胞中参加500ul冷的蛋白提取液,混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟。

5. 在4℃,14000rpm条件下离心15分钟。

6.  快速将上清吸入另一预冷的洁净离心管,即可得到磷酸化蛋白。

7. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下流实验③。

方法:

1. 提取液制备:每500ul冷的蛋白提取液中参加2ul蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。

2. 取100mg安排样本剪碎,参加总蛋白提取液,用安排匀浆器匀浆至无显着肉眼可见固体①。

3.  将安排匀浆吸入一预冷的洁净离心管中,在4℃,10000rpm条件下离心5分钟。

4. 将上清吸入另一预冷的洁净离心管,即可得到磷酸化蛋白。

5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下流实验。