就一个实验室而言无论运作的多么好，总会因为革新技术或拓展方向二影响原来的流程，从而产生各种各样的问题。有些地方错误的操作有可能带来严重的后果，那么今天主要列举造成细胞生长缓慢的两大原因。

一、培养体系出现问题

1.检查你所培养的细胞是否存在污染。

（1）如果培养细胞未添加抗生素，细胞污染则是不可避免的。

  ①  用肉眼和显微镜进行检查。

  ②  如果细胞被污染则要弃掉。

（2）由于支原体污染不容易觉察到，因此必须定期检测。

（3）检测可能污染的途径和原因。

2.检查你用于培养细胞的培养基和血清（例如：是否批次不同或厂商不同）。如果你常规使用的是粉剂或10×储存液，而现在购买的培养基更换为1×液体，而随后证明问题就出自于此。

3.如果问题与培养基无关，那么很可能还是细胞的问题。

（1）复苏另一支冻存的细胞，并且与正在培养的细胞加以比较。两种细胞的培养应分开，以免在培养之初就产生污染。随后按（2）～（4）步的方法做排查:

（2）对传代培养的细胞进行计数，并绘制生长曲线，与以前培养该细胞的资料进行比较，检查是否有下列改变:

  ①  传代时是否接种密度过低。

  ②  细胞传代是否过于频繁。

  ③  传代前细胞平台期是否过长。

（3）是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号，检查批号和供货商。

（4）是否细胞分离过程中严重损伤了细胞，应检测:

  ①  胰蛋白酶（其他消化试剂）消化时间是否过长。

  ②  消化液的浓度和活性是否过高、过强。

  ③  胰蛋白酶消化时，孵箱温度是否过高。

  ④  吹打消化细胞时是否过于用力。

  ⑤  细胞是否对 EDTA过于敏感（如果添加了EDTA）。

  ⑥  胰蛋白酶稀释是否有误。

  ⑦  是否使用了一批劣质的胰蛋白酶消化液。

二、检查共用的设备和试剂

温室和孵箱温度

（1）温度和温度设定不准。

  ① 自动调温器损坏。

  ② 开关孵箱门过于频繁。

  ③ 孵箱门未关紧。

  ④ 风扇损坏造成散热不均。

（2）孵箱湿度不能维持

  ① 水盘中未加水。

  ② 孵箱有渗漏。

  ③ 开关孵箱门过于频繁。

  ④ 在Petri培养皿中放置一定量的PBSA，每日称重，以检查蒸发率。

（3）孵箱的CO2浓度不准

  ① 开关孵箱门过于频繁。

  ② CO2控制器出现问题。

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