酶联生物为您讲解细胞培养的小知识

细胞培养技术的发现，使得很多研究不必局限于在动物体内进行，试验环境更为简单，目的更为明确，如：细胞内活动的基础研究；细胞与细胞相互作用；细胞与环境间的相互作用；遗传学与细胞转化；细胞产物和分泌等等。细胞培养技术的发展很大程度上是由医学研究的需求而促进的，如：抗病毒疫苗的研究，肿瘤发生及治疗的研究；基因重组技术；单克隆抗体技术；组织工程；染色体分析等体外检测技术，以及体外辅助生殖技术。

细胞在已知的理化环境的调控下生长，并在已知成分的营养物质中传代，使得人们对于细胞增殖和调控更加容易，但是同时细胞培养必须在严格的无菌条件下进行，且利用细胞进行生产的投入也更高，如何能在细胞培养的整个阶段尽量降低环境风险，通过规范的实验操作提高细胞的存活率以及一致性，将从

细胞培养的几个关键阶段为广大的实验工作者提供具体的操作注意事项解析并提出对应的解决方案。在这个过程中，细胞状态较为敏感，应尽量减少细胞的应激因素。

细胞复苏

对细胞悬液进行离心：是为了增加细胞浓度或洗除有关试剂（如DMSO），离心力达到80-100 x g即可，可调速度非常重要，离心力过高会造成细胞受损。

用移液器移取培养液或者细胞悬液：以更好控制加样速度、准确度和重复性。如果只是短时间的细胞培养，污染问题或许不会很明显，但是大多时候我们在细胞培养的前期，目的是为了稳定的长期的培养传代，必须要考虑防止微生物污染和交叉污染。

细胞培养和传代

在细胞培养过程中，除了细胞本身的生长特性，环境也会影响细胞的状态。

1：细胞生长的附着物或支持物性质（如：细胞培养瓶/板或细胞培养载体）；

2：细胞培养基的理化性质和成分；

3：气相成分；

4：培养温度等。合适的培养环境才可以使细胞表现出特定的功能。

无论是原代培养还是细胞系的传代培养，都要定期更换培养基。而传代培养过程中，细胞通常遵循一种标准的方式生长：接种后经过一段潜伏期进入指数生长期，即对数期，在这一阶段细胞的生长状态最好。此后细胞密度将逐渐增加到铺满整个细胞培养板/皿/瓶有效基质，当细胞浓度超出培养基的能力时，细胞生长速度将大大减慢，这时可以选择更换培养液或进行分瓶培养，也就是传代。悬浮细胞培养由于机械力保持细胞在悬浮状态，培养和传代过程也不需要胰蛋白酶消化，但是无论哪种情况，都有相似的生长周期。

细胞冻存

越来越多细胞培养物用于药物的研发和生产，建立开发的细胞系众多，每一个细胞系都是独特的，必须通过保存细胞系来保证后续研究和生产的需要。

为使细胞在复苏时存活率最高，除了复苏条件的控制和操作的规范，最佳的冻存条件和细胞状态也非常重要。

最佳的冷冻条件可以最大化降低细胞内晶体形成，减少细胞内谁凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，通常要经过缓慢冷冻，同时用亲水的低温保护剂排除水分，并在尽可能低的温度下保存细胞，降低高浓度盐对冰中蛋白质变性的影响。最终可以通过快速复苏减少细胞内晶体的形成以及细胞内残余冰晶溶解时对细胞的损伤，实现细胞活性和状态的最佳保持。