我司讲述ELISA试剂盒技术流程

双抗体夹心法(检测末知抗原)
1.用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml. 在反应孔中加0.1ml , 4°C过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。

2.加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中, 置37°C孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37%C 孵育0.5~ 1小时,洗涤。

4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml , 37°C 10~ 30分钟。

5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-” 号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔0D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

间接法(检测未知抗体)
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml ，每孔加0.1ml , 4°C过夜。次日洗涤3次。

2.加样:加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37°C孵育1小时，洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)

3、加酶标抗体:于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标*抗体(抗抗体)0.05ml , 37C孵育30-60分钟,洗涤*后- -遍用DDW洗涤。

4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml , 37%C 10~ 30分钟。

5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6.结果判定:可于白色背景上。直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、 “-” 号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O值,若大于规定的阴性对照0D值的2.1倍,即为阳性。

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