想成功培养出细胞想要的结果,要注意以下事项:
1、从液氮罐中拿出冻存管时要做好防护工作,特别是避免液氮溅到眼睛里,有条件的实验室可以配备防冻手套和护目镜;
2、取出的冻存管要先确认管内没有液氮,再放入37度水浴锅,有液氮的情况下很容易因为管内压强突然增大而导致冻存管炸裂,轻则细胞无法使用,重则伤及实验人员;
3、融化过程中要不断轻轻摇晃冻存管,使其尽快融化,但摇晃程度要把握得当,不能让水浴锅中的水渗进冻存管中;
4、离心的具体转速和时间视细胞而定,通常难养的细胞需要降低转速,缩短时间,以减少离心对细胞的伤害;
5、部分对离心敏感的细胞(主要是原代细胞)可以采用融化后不离心,直接重悬后补足培养基培养,待其贴壁后再换液去掉冻存液中DMSO的方式处理;
6、如果冻存细胞量不多,可以在冻存管盖上标注离心方向,以便确定离心后细胞团位置,吸去上清时调整冻存管角度,使细胞团位于最下方,可以尽量减少细胞损失。
二、细胞污染的预防
1、实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌要仔细,并在无菌实验检测阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。
2、操作过程防止污染。
3、穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。
4、实验开始前需要确定戴的手套没有问题,只要接触过生物安全柜之外的物品,必须及时对手套进行消毒。
5、进入细胞培养间后关好门,坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞,不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内,更不能随便使用,以免造成大规模污染。
6、细胞操作时动作要轻,必须在火焰周围无菌区内打开瓶口,并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼,注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。
7、实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低,尽量减少谈话,打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区,以免造成不必要的污染。
8、瓶盖应当倒放在远离自己的地方,以避免瓶盖被误操作所污染。
9、不要从敞开的容器口上方经过,以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。
10、实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液枪枪头和移液管,切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾,保持实验室清洁整齐,最后用75%酒精清洁台面。
三防止细胞交叉污染
1、在进行多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分,最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作,一次只处理一种细胞,多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。
2、在进行换液或传代操作时,粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口,以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。
3、所有细胞一旦购置,或从别处引入,或自己建立,必须及时保种冻存,一旦发生污染可重新复苏细胞,继续培养。
看了这些您还担心细胞培养吗?上海酶联生物以解决您的问题为己任,不断完善自身,提高企业文化,以便更好的服务于科研事业,欢迎您的咨询来电。