在ELISA实验中,不同的检测标本的制备方法也不同,接下来,酶联生物总结下常见的集中标本的制备方法,仅供大家参考:
制备:
检测可溶性蛋白: 根据产品说明书制备血清、血浆标本,由于有些样品对温度敏感极易丧失活性,应尽快分离并分装(一般300~ 500ul/管),大多数标本收集和实验在同一天应贮存在2~8C。若无法立即测定,应贮存在-70C,标本贮存时间一不宜过长,避免反复冻融。使用前将标本平衡至室温,融化标本严禁使用水浴锅。冻存后或冷藏时间过长的标本可能会出现沉淀或小凝集块,应在实验前离心或过滤(0.45um滤膜)标本,体积少的标本不建议过滤。所有标本的收集要使用无菌管,在无菌/半无菌条件下操作防止污染。
血清: 将血液在室温凝集10~15分钟,1500g离心20~30分钟,小心吸取血清。
血浆: 按试剂盒中的说明书选择抗凝剂。收集血液时,轻轻摇动试管使抗凝剂与血液充分混合。将血液在室温保存10~ 15分钟,1500g离心15~20分钟,小心吸上层血浆。
尿液: 将尿液收集在无菌的容器内。1500g离心10~15分钟或过滤(0.45um滤膜 )去除杂质。注意:对于尿液标本实验的回归系数可能发生变化。
细胞培养上清液: 1500g离心10~15分钟去除细胞和细胞残渣。若使用常规典型的培养基,应制备两条标准曲线,-条使用标准品稀释液/或实验缓冲液配制标准品,另一条以细胞培养基配制标准品。若两条标准曲线的变化范围在10%内,实验结果可用任一曲线分析。
检测细胞相关和细胞内蛋白: 细胞相关蛋白和其它细胞内蛋白在ELISA实验前需要对标本进行处理将目的蛋白释放出来。
以上是上海酶联生物为你讲述:ELISA实验标本的实验制备。上海酶联生物以解决您的问题为己任,不断完善自身,提高企业文化,以便更好的服务于科研事业,欢迎您的咨询来电。