ELISA试剂盒竞争法既可用于抗原半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以抗原竞争法为例，将已知抗体吸附于固相载体，加一定量已知酶标抗原及待测抗原，使两者竞争与固相抗体结合，经洗涤，结合于固相抗体上的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。步骤如下:
(1)已知抗体包被酶标板，4℃隔夜。
(2)测定管内加一定量酶标抗原和待检样品，对照管内只加相同量酶标抗原。温育，洗涤。
(3)分别于测定管、对照管内加一定量底物显色。
(4)用酶标仪测定对照管、测定管内OD值，用空白调零。通过对照管与测定管OD值之差，计算标本中待测抗原含量。
进行ELISA试剂盒操作时应注意以下几点:
①实验室温度应控制在18°℃~25℃;
②加样须准确，同一样本设立对照管、测定管各两孔，取其平均值;
③严格控制温育反应温度及时间，洗涤应充分;

④结果判定应以仪器为准，肉眼仅作参考。

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