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Rat ADAM9 ELISA Kit的原理及收集方法

Rat ADAM9 ELISA Kit样品收集方法:
1:血清:全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃,1000×g离心20分钟,取上清即可检测。
2:血浆:抗凝剂推荐使用EDTA-Na2,样品采集后30分钟内于2-8℃,1000×g离心15分钟,取上清即可检测。
3:组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1 g的组织样品对应9 mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g离心5-10分钟,取上清检测。
4:细胞提取液:贴壁 细胞用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5分钟后收集细胞;悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。
将提取液于2-8℃,1500×g离心10分钟,取上清检测。

5:细胞培养上清或其他生物体液:收集液体后于2-8℃,1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

Rat ADAM9 ELISA Kit

Rat ADAM9 ELISA Kit本试剂盒采用双抗体夹心SP-ELISA方法:将特异性的捕获抗体包被于高亲和力的酶标板上,酶标板中对应加入标准品及待测样品,样品及标准品中的靶蛋白被捕获,生物素化的检测抗体与靶蛋白结合, SP复合物与生物素化检测抗体结合,形成免疫复合物,检测过程中每一步经过洗涤液的彻底洗涤,游离的成分均被洗去,用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的作用下,若反应孔中有靶蛋白则显蓝色,加入终止液后变黄色,用酶标仪在450 nm处测OD值,靶蛋白浓度与OD值之间呈正比,根据OD值绘制标准曲线计算出样品中靶蛋白的含量,进而对检测的样品进行定性/相对定量的统计分析。