Rat ADAM9 ELISA Kit的原理及收集方法

Rat ADAM9 ELISA Kit样品收集方法：
1：血清：全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
2：血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于2-8℃，1000×g离心15分钟，取上清即可检测。
3：组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1 g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
4：细胞提取液：贴壁 细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。
将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。

5：细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于2-8℃，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

Rat ADAM9 ELISA Kit本试剂盒采用双抗体夹心SP-ELISA方法:将特异性的捕获抗体包被于高亲和力的酶标板上，酶标板中对应加入标准品及待测样品，样品及标准品中的靶蛋白被捕获，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SP复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合物，检测过程中每一步经过洗涤液的彻底洗涤，游离的成分均被洗去，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的作用下，若反应孔中有靶蛋白则显蓝色，加入终止液后变黄色，用酶标仪在450 nm处测OD值，靶蛋白浓度与OD值之间呈正比，根据OD值绘制标准曲线计算出样品中靶蛋白的含量，进而对检测的样品进行定性/相对定量的统计分析。