风帆，不挂在桅杆上，是一块无用的布;桅杆,不挂上风帆，是一根平常的柱;理想，付诸行动是虚无缥缈的雾;行动，而没有理想,是徒走没有尽头的路。酶联生物给您解答悬浮细胞培养的正确方法。
一、材料与仪器
1.冻存HeLa S3 细胞
70%乙醇MEM-10胰酶/ EDTA
旋转瓶培养基-5 25 cm2 组织培养瓶C02培养箱Sorval1 H-6000A 转子100 m1或200 m1通气旋转瓶和带滤膜的瓶盖
二、步骤
1.将含有冻存HeLa S3细胞的安瓿放入37C水浴中解冻。
2.用70%乙醇对安瓿的顶端进行消毒， 打开安瓿，用吸管将细胞转移到含有5m1 MEM-10培养基的25 cm2组织培养瓶中，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布于培养瓶中，放入5% C02加湿培养箱中37C培养过夜。
3.将培养基吸出，用0.5 m1 37C的胰酶/EDTA覆盖细胞，消化30~40 s。
4.加入10m1旋转瓶培养基-5，并将细胞转移至50ml的离心管中。室温1800g离心5min，弃上清。
5.将细胞沉淀悬浮在5 ml的旋转瓶培养基-5中，上下吹打，将细胞团打散。
6.在100m1或200m通气旋转瓶中加入50 ml旋转瓶培养基-5，并将细胞悬液转移到瓶中。
7.取出1 ml细胞悬液，用血细胞计数器(附录3F)进行细胞计数。加入适量的旋转瓶培养基-5， 使细胞密度为(3~4) X 105细胞/m1。将细胞放入无C02培养箱，37C旋转培养。
8.随后的两天让细胞继续生长， 并且每天对细胞进行计数， 加入适量的旋转瓶培养基-5 以维持(3~4) X105细胞/m1的细胞密度。
9.取1 m1的细胞悬液，用血细胞计数器对细胞进行监测。
10.当细胞密度达到(4~5) X105细胞/m1时，隔天或每天用培养基将细胞稀释至1.5X105 或2.5>105细胞/m1。
11.分别将装有50 m1或100 m1细胞悬液的100 ml或200 m1通气旋转瓶放入37C无C02培养箱旋转培养。每天或隔天传代。
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