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ELISA实验细胞处理方法整理

利用进行检测的样本类型包括常见的血液(血清、血浆),组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、列腺液、精液、分泌物等,这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到实验的结果,下面就常见细胞处理方法的整理,希望对您有所帮助。ELISA试剂盒处理方法整理!

细胞裂解液:

1. 贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集):

2将收集到的细胞用冷PBS洗3次;

3物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):

4将标本于2-8度1500×g离心10分钟,收集上清备用。

→超声破碎:取适量PBS重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂;

→反复冻融:将待破碎的细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复3次,使细胞溶胀破碎;

一般情况下,物理方法如反复冻融,匀浆等方法会比化学方法好,因为化学方法会引I入酸或碱,可能会对ELISA实验产生影响。我们也做

了相关实验来评测化学提取液和洗涤剂对ELISA检测的影响,如RIPA、TritonX-10O、NP-40和SDS、脱氧胆酸钠、β疏基乙醇、DTT和

尿素。根据我们的质检结果,高浓度的洗涤剂会影响ELISA检测的终结果。然而,其效果会洗涤剂浓度的降低而减少。与其他化学裂解缓

冲液相比,1%的TritonX-100和1%NP-40对ELISA检测的影响较小。如果一定要用化学提取方法的话,推荐用这两种洗涤剂来提取靶

蛋白。利用化学的细胞裂解液裂解细胞,如果去污剂成分会干扰抗原抗体反应影响检测效果,推荐利用透析和超滤的方法除去去污剂成

分。

处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意

不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存,4度保存应小于1周,-20度不应超过1个月,-80度不应超过2个月。在标本使用应缓

慢均衡至室温,不应加热使之融解。样本的处理是实验成功的第1步,以上就是关于常见样本处理方法的一个简述,供研究者参考。