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猪o型口蹄疫合成肽结构蛋白elisa抗体检测试剂盒

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48T 96T
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                                                猪 O 型口蹄疫合成肽结构蛋白 ELISA 抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

                                                                               使用说明书


【产品名称】

通用名:猪 O 型口蹄疫合成肽结构蛋白 ELISA 抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

英文名:Test Kit for Antibodies to Porcine Foot and Mouth Disease Virus O (ELISA)

【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒

【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病,其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。

本试剂用于检测猪血清中口蹄疫病毒 O 型抗体,可用于口蹄疫病毒 O 型疫苗免疫效果评价。

【原 理】

本试剂盒系由预包被口蹄疫病毒O型VP1抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中猪口蹄疫病毒O型抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有猪口蹄疫病毒O型抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有口蹄疫病毒O型抗体。

【试剂盒组成】


【储存及有效期】 于 2~8℃避光保存,有效期为 12 个月。

包被板开封后请于 2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为 2 个月。

【适用仪器】 含 450nm、630nm 波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品 1 周内可于 2~8℃保存,长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按 40 倍稀释(如 5μl 血清加入 195μl 样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作 20 倍稀释。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温 30 分钟,恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条,设空白对照 1 孔、阴性/阳性对照各 2 孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液 100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照 100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品 100μl。

4.混匀,置 37℃反应 30 分钟。

5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,重复洗涤 5 次,拍干。

6.每孔加酶标记物 100μl(空白孔除外)。置 37℃反应 30 分钟。

7.洗涤,同步骤 5。

8.每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl,混匀,37℃避光反应 10 分钟。

9.每孔加终止液 50μl,混匀,于 450nm(可用 630nm 作参比波长)测定各孔吸光值(A 值),无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。

【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照≤0.10,阳性对照≥0.6。

【检验结果的解释】

1.样品 A 值≥0.38 为阳性;样品 A 值在 0.2 到 0.38 之间为可疑;样品 A 值<0.2 为阴性。

2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足,建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪口蹄疫病毒 O 型抗体,根据 A 值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

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