人肾皮质近曲小管上皮细胞
(HK-2)
细胞介绍
该细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生 化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生 包装细胞Psi-2，Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，最后 将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7 中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2 细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。
细胞特性
1)来源：正常肾
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备角化培养基（Defined K-SFM，货号：10785-012);角化因子（500X);添 力口 5ng/mLEGF;双抗 1%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补 加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。
2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培
养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止 消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分 钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。
将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，细 胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为 10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管中，注意冻存 管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液 氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立 即与我们联系。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注 意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后 立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细 胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。
