小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14 (MC3T3E1 Subclonel4)

细胞介绍

从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。从含抗坏血 酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。MC3T3 亚克隆4 (ATCCCRL-2593)和MC3T3亚克隆14 (ATCCCRL-2594)在抗坏血酸和

3到4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。它们10天后形成一 个矿化良好的细胞外基质（ECM)。MC3T3亚克隆24 (ATCCCRL-2595)和MC3T3 亚克隆30(ATCCCRL-2596)在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化。不形成 ECM，可以作为亚克隆4和14的阴性对照。矿化的亚克隆选择的表达作为成骨 细胞标记的mRNA，及唾液酸糖蛋白(BSP)，骨钙素(OCN)，和甲状旁腺激素/甲状 旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出 相似数量的胶原质，表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfal，一种成骨 细胞相关转录因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亚克隆形成与骨类似的 形成小骨的编织骨，低分化细胞只是产生纤维组织。这些细胞系是研究体外成骨 细胞分化的好模型，尤其是ECM信号。它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类 似。

细胞特性

1)来源：颅顶骨

2)形态：成纤维细胞

3)含量：>lxl06 个/mL

4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后 立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细 胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞培养步骤

一.培养基及培养冻存条件准备：

1)准备MEM a培养基(MEM a，GIBCO，货号12561-056);北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号 16000-044)，10%。

2) 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。

3)冻存液：90%完全培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。

1. 复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补 加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培

养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止 消化。

按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分 钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。

将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者 瓶中。

3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃 去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后 加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。

注意事项：

收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立 即与我们联系。

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注 意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。