狗肾细胞

(MDCK(NBL-2))

细胞介绍

1958年九月S.H. Madin and N.B. Darby从一只外观正常的成年雌性英国小猎犬的

肾分离等到MDCK细胞株。角蛋白免疫过氧化物酶染色呈阳性。MDCK被用于研

究0 -粥样蛋白前体的处理及其蛋白水解产物。

细胞特性

1)来源：狗肾

2)形态：上皮细胞样，贴壁生长

3)含量：>lxl06 个/mL

4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

细胞接受后的处理：

1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2.请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养约

2-3h〇

3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。

4.如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附

带的完全培养基。

5.接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我

们取得联系。

 

细胞用途：仅供科研使用。

本公司的细胞培养操作规程，供参考

1)培养基及培养冻存条件准备：

1.准备MEM a培养基(MEM a，GIBCO，货号12561-056)，90%;优质胎牛血

清，10%。

2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度

为 70%-80%。

3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

2)细胞处理：

复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中（水面要低

于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心

管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培

养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。

第二天换液并检查细胞密度。

 

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培

养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部

分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的

培养基终止消化。

轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，

弃去上清液，加入lmL培养液后吹匀。

移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养

基的T-75培养瓶中培养。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先

要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，

最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO

至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管

中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

注意事项：

收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，

请立即与我们联系。

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，

并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。