仓鼠卵巢细(CHO/DHFR)

细胞介绍

该细胞为二氢叶酸还原酶缺陷细胞。在没有HT (次黄嘌呤-胸腺嘧啶）时细胞会

死亡。细胞培液中加氨甲喋呤可以防止对药物低抗性的回变细胞的生长。

细胞特性

1)来源：中国仓鼠

2)形态：贴壁生长时，呈上皮细胞样。

3)含量：>lxl06 个/mL

4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后

立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细

胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。

 

细胞培养步骤

1)培养基及培养冻存条件准备：

1.准备IMDM培养基(GIBCO,货号12200036);优质胎牛血清，15%，双抗1%;

用于表达蛋白时，也可使用悬浮培养基，使细胞悬浮生长。

2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱

湿度为70%-80%。

3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

2)细胞处理：

1.复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加

入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补

加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将

细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检

查细胞密度。

2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培

养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部

分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止

二氢叶酸还原酶缺陷型 中国 仓鼠卵巢细胞

(CHO/DHFR)

按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分

钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。

将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者

3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

 

下面T25瓶为例；

 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，细

胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为

10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管中，注意冻存

管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液

氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项：

收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立

即与我们联系。

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注

意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

瓶中。