分光光度法:50管/24样
注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GOGAT 广泛分布于植物中,和谷氨酰胺合成酶共同构成 GS/GOGAT 循环,参与氨同化的调控。GOGAT 分为以 NADH 为还原剂的 NADH-GOGAT 和以铁氧还蛋白为还原剂的Fd-GOGAT。Fd-GOGAT 主要存在于叶绿体基质中,与光合作用和光呼吸有关,主要同化NO3-还原和光呼吸产生的 NH4+。
测定原理:
Fd-GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸,形成两分子的谷氨酸,谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸的脱氢反应,同时产生 NADH,使 WST-8 显橙黄色,在 450 nm 下测定吸光值。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。