微量法100管/96样
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1)是C4途径和景天科酸代谢途径的限速酶,催化ATP、丙酮酸和Pi经三步反应生成磷酸烯醇式丙酮酸。该酶主要存在于C4植物的叶绿体基质中,对光合功能具有重要调节作用。
测定原理:
PPDK的逆向反应催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP和PPi生成丙酮酸、ATP和Pi,乳酸脱氢酶进一步催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+,在340nm测定NADH减少速率,计算PPDK活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。