谷氨酰胺合成酶(GS)测试盒
一、测定原理
GS 在 ATP 和 Mg2+的存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为γ-谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下形成的络合物在 540nm 处有最大吸收峰,可用分光光度计测定其吸光值来判定 GS 的活力。
二、样本前处理
1、组织:按照组织重量(g):提取液体积(ml)为 1:10 的比例混合后,冰水浴匀浆,4000
转/min 离心 10min,取上清置冰上待测。
2、血清(浆):直接取样测定。
3、胞、细菌或组织样品:收集细胞或细菌于离心管中,离心后弃上清,按照细胞或 细菌数量(104 个):提取液体积(ml)为 500:1 的比例混合,超声波破碎细胞或细菌(条件:冰浴、功率 20%或 200W、超声 3s、间隔 10s、重复 30 次)后待测。