天冬酰胺酶(ASNase/asparaginase)活性测定试剂盒分光法/48样
产品简介:
天冬酰胺酶（EC 3.5.1.1，ASNase）是一种酰胺水解酶，能够将 L-天冬酰胺脱去氨基生成 L-天冬氨酸和氨。该酶具有抗肿瘤活性，在食品和医药等领域应用十分广泛。天冬酰胺酶（ASNase）催化天冬酰胺水解成天冬氨酸和氨，利用氨在强碱的环境下与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液颜色稳定。其在 630nm 处有特征吸收峰，通过检测氨增加的速率，即可计算该酶活性大小。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、常温离心机、移液器、蒸馏水、振荡仪。
天冬酰胺酶(ASNase)活性测定:
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织（水分足的样本可取 0.2-0.5g），加入 1mL 提取液；进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
[注]：也可以按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，
重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
[注]：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
标准曲线制作过程：
1. 标准品母液（10μg/mL 的氨），把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
2. 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
