天冬酰胺酶(ASNase/asparaginase)活性测定试剂盒分光法/48样
产品简介:
天冬酰胺酶(EC 3.5.1.1,ASNase)是一种酰胺水解酶,能够将 L-天冬酰胺脱去氨基生成 L-天冬氨酸和氨。该酶具有抗肿瘤活性,在食品和医药等领域应用十分广泛。天冬酰胺酶(ASNase)催化天冬酰胺水解成天冬氨酸和氨,利用氨在强碱的环境下与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液颜色稳定。其在 630nm 处有特征吸收峰,通过检测氨增加的速率,即可计算该酶活性大小。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、常温离心机、移液器、蒸馏水、振荡仪。
天冬酰胺酶(ASNase)活性测定:
1、样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织(水分足的样本可取 0.2-0.5g),加入 1mL 提取液;进行冰浴匀浆。12000rpm,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,
重复 30 次);12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10⁴):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提。
③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
标准曲线制作过程:
1. 标准品母液(10μg/mL 的氨),把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
2. 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。