6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)试剂盒(WST-8法)分光法/48样
产品简介:
6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH;EC 1.1.1.49)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是磷酸戊糖途径的关键酶,同时维持 NADPH 在细胞内的水平,NADPH 反过来维持细胞中谷胱甘肽水平进而保护细胞免受氧化损伤。因此 G6PDH 活性的高低可以从一定程度上反映生物体的生物合成和抗氧化能力。G6PDH 催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯,同时将 NADP+还原为 NADPH,传统方法是检测 NADPH 在 340nm 处的吸光值。由于 NADPH 的摩尔消光系数(ε)较低,所以这种方法灵敏度低,且严重受到干扰。本试剂盒提供一种简单,灵敏,快速的测定方法:该酶促过程产生的 NADPH 与特异显色剂反应产生在 450nm 处有大吸收峰的有色物质,通过检测 450nm 处的增加速率,进而计算出 G6PDH 酶活性大小。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰。
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
标准曲线制作过程:
1. 制备标准品母液(1nmol/μL):向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水(母液需在两
天内用且-20℃保存)。
2. 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。
3. 依据 40μL 标准品+720μL 试剂一+40μL 试剂三,混匀后室温 5min 后于 450nm 处读值,根据结果即可制作标准曲线。