腺苷脱氨酶(ADA)活性测定试剂盒微板法/96样
产品简介:
腺苷脱氨酶(ADA,EC 3.5.4.4)是一种琉基酶,是嘌呤核苷酸代谢的关键酶,与机体细胞的免疫活性有重要关系。腺苷脱氨酶(ADA)催化腺嘌呤核苷水解,产生次黄嘌呤核苷和氨,利用氨在强碱的环境下与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液颜色稳定。其在 630nm 处有特征吸收峰,通过检测氨增加的速率,即可计算该酶活性大小。
所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
腺苷脱氨酶(ADA)活性测定:
1、样本制备:
① 组织样本:称取约 0.1g 组织(水分足的样本可取 0.2-0.5g),加入 1mL 提取液;进行冰浴匀浆。12000rpm,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
腺苷脱氨酶(ADA)活性测定:
1、样本制备:
① 组织样本:称取约 0.1g 组织(水分足的样本可取 0.2-0.5g),加入 1mL 提取液;进行冰浴匀浆。12000rpm,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例提取。
② 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
标准曲线制作过程:
1 标准品母液(10μg/mL 的氨(分子量是 18)),把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
2 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。