6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)试剂盒(WST-8法)微板法/96样
产品简介:
6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH;EC 1.1.1.49)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是磷酸戊糖途径的关键酶,同时维持 NADPH 在细胞内的水平, NADPH 反过来维持细胞中谷胱甘肽的水平进而保护细胞免受氧化损伤。因此 G6PDH 活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
G6PDH催化6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯,同时将NADP+还原为NADPH,传统方法是检测NADPH在340nm处的吸光值。由于NADPH的摩尔消光系数(ε)较低,所以这种方法灵敏度低,且严重受到干扰。
本试剂盒提供一种简单,灵敏,快速的测定方法:该酶促过程产生的NADPH与特异的显色剂反应,产生在450nm处有大吸收峰的有色物质,通过检测该有色物质在450nm的增加速率,进而计算出G6PDH酶活性的大小。
[注]:粉剂量在mg级别,使用前用手甩几次或者进行离心,打开直接加入要求的试剂即可。
所需的仪器和用品:
所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰。
6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活性测定:
6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(1nmol/μL):向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水(母液需在两天内用且-20℃保存)。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。