测定意义:
辅酶Ⅱ NADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和 NADPH 含量测定可以计算 NADP (NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。 NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在 PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重 要调控作用。
测定原理:
分别用提取液提取样品中NADP+和NADPH。在1-mPMS作用下,WST-8可与NADPH 反应,产生水溶性formazan,在450nm下有特征吸收峰,而NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH,进一步采用 WST-8 检测。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
预实验的意义:
注 意:
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。
预实验的意义:
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3 - 5组预实验,判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。





