细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的阶段性过程。染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300 kb的大片段，然后大约30%的染色体DNA在Ca2+和Mg2+依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180-200 bp核小体DNA多聚体。因此在细胞凋亡晚期，DNA会被降解为180-200 bp的片段，断裂的基因组DNA上暴露出大量的3'-OH末端。末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）是一种不依赖于模板的DNA聚合酶，可以催化脱氧核苷酸结合到断裂的DNA分子3'-OH末端。因此TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)细胞凋亡检测试剂盒可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在TdT酶的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-OH末端掺入四甲基罗丹明-dUTP（Tetramethyl-Rhodamine-5-dUTP，TMR-5-dUTP），从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测（TMR激发551 nm，发射575 nm）。本试剂盒应用范围广，适用于石蜡组织切片，冰冻组织切片、细胞爬片、细胞涂片等的细胞凋亡检测。
产品组成
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产品名称
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产品包装
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Recombinant TdT Enzyme |
45µL |
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TMR-5-dUTP Labeling Mix |
220µL |
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Equilibration Buffer |
5mL |
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Proteinase K（200 µg/mL） |
500µL |
实验前准备
1. PBS磷酸盐缓冲液
2. 固定液：溶于PBS的4%多聚甲醛，pH 7.4
3. 破膜液：0.1%-0.5% Triton X-100
4. 如需染核，需自备DAPI（2 µg/mL）
5. 如需阳性对照实验，需自备DNase I
6. 如果用流式细胞仪，自备PI染液和RNase A（DNase free）
7. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。
储存与运输
本试剂盒储存在-20℃，TMR-5-dUTP Labeling Mix需避光储存于-20℃，有效期12个月。
