测定意义 :
TBA由肝脏分解代谢,其血清浓度升高反映肝实质性损伤。因此,TBA测定用于监测慢性肝病价值很大。
测定原理:
胆汁酸被3a-羟甾醇脱氢酶(3a-HSD)以及氧化型β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸(Thio-NAD)特异性氧化,生成3-酮类固醇以及还原型β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸(Thio-NADH)。生成的3-酮类固醇在3a-羟甾醇脱氢酶及还原型β-烟酰胺脲嘌呤二核苷酸(Thio-NADH)存在下,再生成胆汁酸及氧化型β-烟酰胺脲嘌呤二核苷酸(NAD)。如上所述循环放大使检测灵敏度提高。测定在单位时间内生成的还原型β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸(Thio-NADH)在405nm.处的吸光度变化,以求得胆汁酸的含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。
预实验的意义:
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3 - 5组预实验,判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注 意 :正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定





