测定意义 :
一氧化氮合成酶(NitricOxideSynthase,NOS,EC 1.14.13.39)是生物体内催化L-精氨酸合成NO的一类酶, 主要存在于血管平滑肌、巨噬细胞、内皮细胞、神经细胞、肝细胞、肾小球膜细胞等各种细胞中。NO作为细胞信 息分子,在神经系统、免疫系统和心血管系统中起着重要的调节作用。
根据其酶活性对钙离子的依赖性不同,分为结构型NOS(constitutiveNOS,cNOS)和损伤诱导型NOS(inducible NOS,iNOS),前者需要一定浓度的钙离子方可激活,后者不依赖于外源钙离子。
测定原理:
NOS催化L-精氨酸、分子氧和NADPH,生成NO和NADP+,NO在水溶液中极易氧化生成NO²-和NO³-。在酸性条件下,NO²-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在550nm处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算得到NOS活性大小。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。
预实验的意义:
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3 - 5组预实验,判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注 意 :正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定





