测定意义:
ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
测定原理:
己糖激酶(HK)催化葡萄糖和ATP生成6-磷酸葡萄糖,后者在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下生成NADPH。NADPH在电子耦合试剂存在下,将WST-8还原为水溶性橙黄色的formazan,该产物在450nm处有特征吸收峰。
需自备仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
预实验的意义:
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3 - 5组预实验,判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注 意 :正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定





