摘要:
目的 探讨非酒精性脂肪性肝病( NAFLD) 中自噬与脂质代谢的相互作用。方法 体外人肝细胞培养( 脂肪变性) 制备 NAFLD 细胞模型，雷帕霉素诱导细胞自噬，3 － 甲基腺嘌呤抑制细胞自噬，MTT 比色法测定细胞活力，ELISA 法检测各组细胞 TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb 水平，IF 法检测 LC3 － 的定位与分布，Western Blot 检测 LC3 － / LC3 － 比值。计量资料多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用 SNK － q 检验。结果 诱导自噬组的吸光度值和细胞活率与脂肪变组比较，明显下降( HL － 7702 细胞 q 值分别为 4． 160、4． 110，SK － HEP － 1 细胞 q 值分别为 4． 407、4． 032; P 值均 ＜ 0． 05) 。脂肪变组 TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb 水平与对照组相比，明显升高( HL － 7702 细胞 q 值分别为 5． 316、3． 730、4． 013、6． 967、6． 192、5． 531，SK － HEP － 1 细胞 q 值分别为 4． 963、3． 603、4． 774、7． 479、6． 319、5． 193; P 值均 ＜ 0． 05) 。诱导自噬组 TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb 水平与脂肪变组相比，明显降低( HL － 7702 细胞 q 值分别为 4． 978、3． 695、3． 960、5． 130、4． 695、3． 192，SK － HEP － 1 细胞 q 值分别为 3． 846、5. 575、4. 184、5． 019、4. 203、3． 049;P值均 ＜ 0． 05) 。LC3 － 在各组肝细胞中的标记值，诱导自噬组最高( HL － 7702 细胞为 90． 1% ，SK － HEP － 1 细胞为 80. 0% ) ，其次是脂肪变组( HL － 7702 细胞为 47． 2% ，SK － HEP － 1 细胞为 48． 4% ) 及抑制自噬组( HL － 7702 细胞为 30． 2% ，SK － HEP － 1 细胞为 45. 5% ) 。诱导自噬组 LC3 － / LC3 － 比值与脂肪变组相比，明显升高( HL － 7702 细胞 q 值为 6. 786，SK － HEP － 1 细胞q 值为5． 926; P值均 ＜ 0． 05) 。结论 自噬的上调有利于促进肝脏脂肪的清除，而下调则促进脂质的聚积。
材料与方法
材料 HL － 7702 细胞和 SK － HEP － 1 细胞株( 西安东澳生物科技有限公司) ，10% 脂肪乳注射液( 四川科伦药业股份有限公司) ，雷帕霉素 ( Selleck，S1039) ，3 － 甲基腺嘌呤 ( 3 － MA) ( Selleck，S2767) ，LC3B ( D11 ) XP Ｒabbit mAb ( CST，3868S) ，Anti －PKC epsilon 抗体( Abcam，ab124806) ，油红 O 染色液( 南京建成科技有限公司，D027 ) ，科研人甘油三酯( TG) ELISA 试剂盒 ( 上海酶联生物科技有限公司，ml026468) ，科研人 ALT 检测试剂盒 ( 上海酶联生物科技有限公司，ml027133) ，科研人 AST 检测试剂盒( 上海酶联生物科技有限公司，ml024056) ，科研人乳酸脱氢酶( LDH) 检测试剂盒( 上海酶联生物科技有限公司，ml024518) ，科研人 GGT 检测试剂盒( 上海酶联生物科技有限公司，ml027457) ，科研人 Alb 检测试剂盒( 上海酶联生物科技有限公司，ml025061) 。倒置荧光显微镜( OLYMPUS) ，冷冻离心机( Eppendorf) ，电热恒温培养箱( 天津泰斯特仪器有限公司) ，Mini － PＲO-TEAN Casting stand( Bio － Ｒad) ，Power PacTM HC 高电流电泳仪 ( Bio － Ｒad) ，Mini － PＲOTEAN 电泳槽( Bio － Ｒad) ，Mini Trans － Blot 转印槽( Bio － Ｒad) ，iMa-rkTM 酶标仪( Bio － Ｒad) 。
