摘要:
目的 探讨非酒精性脂肪性肝病( NAFLD) 中自噬与脂质代谢的相互作用。方法 体外人肝细胞培养( 脂肪变性) 制备 NAFLD 细胞模型,雷帕霉素诱导细胞自噬,3 - 甲基腺嘌呤抑制细胞自噬,MTT 比色法测定细胞活力,ELISA 法检测各组细胞 TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb 水平,IF 法检测 LC3 - 的定位与分布,Western Blot 检测 LC3 - / LC3 - 比值。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用 SNK - q 检验。结果 诱导自噬组的吸光度值和细胞活率与脂肪变组比较,明显下降( HL - 7702 细胞 q 值分别为 4. 160、4. 110,SK - HEP - 1 细胞 q 值分别为 4. 407、4. 032; P 值均 < 0. 05) 。脂肪变组 TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb 水平与对照组相比,明显升高( HL - 7702 细胞 q 值分别为 5. 316、3. 730、4. 013、6. 967、6. 192、5. 531,SK - HEP - 1 细胞 q 值分别为 4. 963、3. 603、4. 774、7. 479、6. 319、5. 193; P 值均 < 0. 05) 。诱导自噬组 TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb 水平与脂肪变组相比,明显降低( HL - 7702 细胞 q 值分别为 4. 978、3. 695、3. 960、5. 130、4. 695、3. 192,SK - HEP - 1 细胞 q 值分别为 3. 846、5. 575、4. 184、5. 019、4. 203、3. 049;P值均 < 0. 05) 。LC3 - 在各组肝细胞中的标记值,诱导自噬组最高( HL - 7702 细胞为 90. 1% ,SK - HEP - 1 细胞为 80. 0% ) ,其次是脂肪变组( HL - 7702 细胞为 47. 2% ,SK - HEP - 1 细胞为 48. 4% ) 及抑制自噬组( HL - 7702 细胞为 30. 2% ,SK - HEP - 1 细胞为 45. 5% ) 。诱导自噬组 LC3 - / LC3 - 比值与脂肪变组相比,明显升高( HL - 7702 细胞 q 值为 6. 786,SK - HEP - 1 细胞q 值为5. 926; P值均 < 0. 05) 。结论 自噬的上调有利于促进肝脏脂肪的清除,而下调则促进脂质的聚积。
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材料与方法
材料 HL - 7702 细胞和 SK - HEP - 1 细胞株( 西安东澳生物科技有限公司) ,10% 脂肪乳注射液( 四川科伦药业股份有限公司) ,雷帕霉素 ( Selleck,S1039) ,3 - 甲基腺嘌呤 ( 3 - MA) ( Selleck,S2767) ,LC3B ( D11 ) XP Rabbit mAb ( CST,3868S) ,Anti -PKC epsilon 抗体( Abcam,ab124806) ,油红 O 染色液( 南京建成科技有限公司,D027 ) ,科研人甘油三酯( TG) ELISA 试剂盒 ( 上海酶联生物科技有限公司,ml026468) ,科研人 ALT 检测试剂盒 ( 上海酶联生物科技有限公司,ml027133) ,科研人 AST 检测试剂盒( 上海酶联生物科技有限公司,ml024056) ,科研人乳酸脱氢酶( LDH) 检测试剂盒( 上海酶联生物科技有限公司,ml024518) ,科研人 GGT 检测试剂盒( 上海酶联生物科技有限公司,ml027457) ,科研人 Alb 检测试剂盒( 上海酶联生物科技有限公司,ml025061) 。倒置荧光显微镜( OLYMPUS) ,冷冻离心机( Eppendorf) ,电热恒温培养箱( 天津泰斯特仪器有限公司) ,Mini - PRO-TEAN Casting stand( Bio - Rad) ,Power PacTM HC 高电流电泳仪 ( Bio - Rad) ,Mini - PROTEAN 电泳槽( Bio - Rad) ,Mini Trans - Blot 转印槽( Bio - Rad) ,iMa-rkTM 酶标仪( Bio - Rad) 。