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立秋谈说操作ELISA抽吸的技巧

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在ELISA实验中,洗刷是关键过程之一。而有一些参数会影响洗刷过程的作用,这些参数包括吸液高度和吸入方位,这两者都能调整,以下降背景(残留量)和差异。下面咱们就一起来看看今日的重点内容,公司与您初夏谈说ELISA抽吸的操作技巧。
残留液体中包括未结合的抗原或抗体,它们会添加背景信号。残留量越小,残留液体越少,转移到下一步的搅扰液体也就越少。吸液高度会显着影响残留量;假如洗刷吸头与反响孔底部的距离稍大,那就会让残留量急剧添加。反之,假如洗刷吸头压着反响孔底部,那么也会使吸液效率下降,残留量添加。
 目前的洗板机一般运用两种类型的洗头:刚性和起浮的。起浮洗头中的吸头可在洗刷过程中自在上下移动,而刚性洗头则固定在恰当的方位。运用刚性洗头的洗刷操作在优化起来更为复杂,由于你需求十分细心地调整吸液高度。假如你们实验室运用几种不同的板,那可能会很耗时。在运用起浮洗头时,吸头会降到反响孔的底部。调整高度就不是很重要,因而洗头会下降到底部。
抽吸的方位也对残留量有着重要影响;假如每个孔只运用一个抽吸点(这很常见,由于更快),那么抽吸的方位需求优化。zui佳的方位取决于洗头的性状,但它几乎不在反响孔的中心,即便这是所有洗头zui常见的默许方位。一般来说,zui佳方位在孔中心与孔壁之间的某处。
反响孔的形状也会影响残留量。C形底(平底圆角)的微孔板一般会比那些平底尖角的微孔板残留量更低。
假如没有自动洗板机,采用手艺洗刷,那么也需求留意几点。运用8道或12道微量移液器,采用倒吸的办法进行洗刷;不同厂家的洗液不宜彼此混用。洗板时需确保微孔板平放,将洗刷液注满各孔,但尽量避免漏液溢液,以每孔300 μl为宜;板洗次数一般为3次,要确保洗板的浸泡时刻,每次浸泡时刻一般为30-60 秒;尽量削减洗液残留量,推荐每次洗板后进行决定,并及时替换吸水纸,避免吸水纸的碎屑粘到反响孔内。
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