投诉建议和代测服务及先货发票情况:13818158258 旧版 | EN

邮件订阅产品说明书或动态
首页 > 资讯列表 > 传代培育细胞染色体显示法

传代培育细胞染色体显示法

1.培育细胞:取处于指数生长期、用较大瓶皿培育的、80%~90%汇合单层培育细胞。 
2.加秋水仙素:运用浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液,温箱持续培育6~10小时;或用低温关闭法:把培育细胞置于4℃条件下6~12小时后,再于37℃温箱持续培育6~10小时处理(加秋水仙素)。 
3.收集分裂细胞:可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点,此时手持培育瓶,左右重复横向水平摇动,令培育液在培育细胞外表重复冲刷。应用此法可使90%的中期分裂细胞从瓶壁脱落,留意勿用力过猛,以防多量非分裂细胞脱落影响调查。 
4.离心:收集培育液,1000转/分钟离心5~10分钟。 
5.低渗处理:吸除上清液、加入预温至37℃的0.075M KCl溶液,在温箱中静置20~30分钟。 
6.预固定:向悬液中加新鲜1:3醋酸、甲醇固定液1ml,用吸管吹打调匀,此措施能起到先使细胞外表轻微固定,可防止固定后细胞粘连成块。 
7.固定:离心,同4,吸除上清液,加新鲜固定剂5~10ml;加固定剂时要用一手微斜持离心管,另手用吸管吸取固定剂,把固定剂逐滴滴在离心管壁上,使之渐渐流入离心管中,然后轻轻吹打均匀,置15~20分钟。 
8.重复7,末次离心后,小心吸除大部分上清,据悬液中细胞密度大小,余下固定液0.5~1ml。 
9.制片:用滴片法制片,按如下步骤:彻底洗净载物片,勿留任何油脂,置冰箱中储藏备用。滴片前现从冰箱中取出冷载物片1片,在载物片外表出现细微水气时,当即向片的一侧滴2~3滴细胞悬液,滴片时的距离能保持半米高度才好。滴片后置室温中令其自然干燥,或用吹风机热风吹干亦可。如此制备好的标本可置盒中备用或当即进行染色调查。 
10. 染色和封片:一般常用Giemsa染色:取干液Giemsa 1份加pH6.8磷酸缓冲液9份混合,染色10分钟后,水洗、晒干、可直接调查。如标本需求保存或做长期调查,可过二甲苯两次后,用中性树胶封片后,再过二甲苯,然后封片亦可。