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资讯:公司技术员分分出Z新培养基制备流程

在微生物查验中,正确制备培养基是基础进程之一。试验室运用各种基础成分制备培养基时,应按照配方精确制作,并记载相关信息。日前,上海酶联生物技术员分分出zui新培养基制备流程,在这里共享给我们:
一、水
试验用水的电导率在25℃时不应逾越25μS/cm(相当于电阻率≥0.4ΜΩcm),除非还有规则要求。
水的微生物污染不应逾越103 CFU/mL。应按GB 4789.2,选用平板计数琼脂培养基,在36℃±1℃培养48h±2h进行定时查看微生物污染。
二、称重和溶解
留神称量所需量的脱水组成培养基(必要时佩带口罩或在通风柜中操作,以防吸入含有有毒物质的培养基粉末),先参加适量的水,充沛混合(留意避免培养基结块),然后加水至所需的量后恰当加热,并重复或连续拌和使其快速松散,必要时应彻底溶解。含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟。
三、pH的测定和调整
用pH计测pH,必要时在灭菌前进行调整,除特别阐明外,培养基灭菌后冷却至25℃时,pH应在标准pH±0.2范围内。一般运用浓度约为40g/L(约1mol/L)的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L(约1mol/L)的盐酸溶液调整培养基的pH。如需灭菌后进行调整,则运用灭菌或除菌的溶液。
四、分装
将配好的培养基分装到恰当的容器中,容器的体积应比培养基体积zui少大20%。
五、灭菌
1.一般要求
培养基应选用湿热灭菌法或过滤除菌法。
某些培养基不能或不需要高压灭菌,可选用煮沸灭菌,如SC肉汤等特定的培养基中含有对光和热活络的物质,煮沸后应敏捷冷却,避光保存;有些试剂则不需灭菌,可直接运用。
2.湿热灭菌
湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行,高压灭菌一般选用121℃±3℃灭菌15min,具体培养基按食品微生物学查验标准中的规则进行灭菌。培养基体积不应逾越1000 mL,不然灭菌时可能会构成过度加热。一切的操作应按照标准或运用阐明的规则进行。
灭菌效果的操控是关键问题。加热后选用恰当的方法冷却,以防加热过度。这关于大容量和活络培养基十分重要,例如含有煌绿的培养基。
3.过滤除菌
过滤除菌可在真空或加压的条件下进行。运用孔径为0.2μm的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的。
各个部分或运用预先消毒的设备。一些滤膜上附着有蛋白质或其他物质,为了抵达有用过滤,应事先将滤膜用无菌水潮湿。
4.查看
应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行查看,特别要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等方针进行查看。
六、增加成分的制备
制备含有有毒物质的增加成分(特别是抗生素)时应留神操作(必要时在通风柜中操作),避免因粉尘的分散构成试验人员过敏或发作其他不良反应;制备溶液时应按产品运用阐明操作。
不要运用过期的增加剂;抗生素工作溶液应现用现配;批量制作的抗生素溶液可分装后冷冻贮存,但冻住后的贮存溶液不能再次冷冻;厂商应供给冷冻对抗生素活性影响的有关资料,也可由运用者自行测定。
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