在这一进程中，一般状况下有三次加样，它们分别是加标本，加酶物，加底物。冻住血清融解后，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充沛混匀宜轻缓，避免气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上激烈振荡。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只需待血清天然凝结、缩短后即可获得。也可在板孔中参加稀释液，再在其参加血清标本，然后在微型颤动器上颤动1分钟以确保混和。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，逾越一星期测定的需低温冰存。
1、包被液的挑选：一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，假定包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也能够运用pH7.2的磷酸盐缓冲液。
2、包被浓度的挑选：包被的最适浓度随固相载体和包被物的性质改动，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，要清楚关于特定包被抗原的最适包被浓度需求通过实验来断定。
3、包被温度的挑选：一般是4-8度条件下放置一个黑夜或许37度保温2小时，咱们激烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白活性的坚持。
4、包被抗原的挑选：可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，一般难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质，比如BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。
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