样本采集前必须制定完整的计划，其中应包含采样方法、采样量、保存方法等，并充分考虑待测成分的稳定性。对于当天检测的样本，应使用无菌器材采集，并立即置于4℃保存，并在8小时内完成检测。对于需要第二天再次检测的样本，应使用无菌器材采集后立即分装成一次检测的用量，并置于-20℃冻存备用，以避免反复冻融。如有长期保存需求，建议-70℃或-80℃冻存。对于特殊样本，例如血液或组织样本，需要根据具体待测成分采取相应的特殊处理措施，例如添加抗凝剂或蛋白酶抑制剂等。所有样本均应避免反复冻融。
可用于ELISA实验的样本种类很多，包括：血清、血浆、细胞上清、细胞裂解液、尿液、滑液、脑脊液、肺泡灌洗液、以及各种组织的组织匀浆。这里主要介绍血清、血浆、细胞上清、尿液、细胞裂解液、以及各种组织的组织匀浆的样本制备。
血清
将采集的全血置于室温（18-25℃）下静置30-60分钟，或直至观察到血块完全形成。然后将血液样本在4℃下以1000-2000g的相对离心力离心10分钟。小心地使用移液器吸取上清液（血清），避免触碰血块或产生气泡，并将血清转移至干净的试管中。若保存过程中有沉淀形成，则再次以相同的条件离心。根据检测需求，将血清短期保存在4℃或长期保存在-20℃或-80℃（推荐）冻存。
等离子体
根据检测指标选择合适的抗凝剂（EDTA、柠檬酸钠或肝素），轻轻颠倒混匀血液数次。然后，将血液样本在室温或4℃（推荐用于不稳定指标）下，以1500-2000g的相对离心力离心10-15分钟。小心地使用移液器吸取上清液（血浆），避免触碰下层细胞，并将血浆转移至干净的试管中。若保存过程中有沉淀形成，则再次以相同条件离心。根据待测指标的稳定性，将血浆短期保存在4℃或长期保存在-20℃或-80℃（更推荐）冻存。并记录保存时间，避免样本过期失效。
尿
收集指定时间段的尿液（例如晨尿、随机尿或24小时尿）于无菌试管中。将尿液样本在室温或4℃下以1500-2000g的相对离心力离心10-15分钟，以去除细胞和杂质。小心地使用移液器吸取上清液，转移至干净的试管中。若保存过程中有沉淀形成，则再次以相同条件离心。根据检测需求，将尿液短期保存在4℃或长期保存在-20℃或-80℃冻存。
细胞培养上清液
收集细胞培养上清液到无菌离心管中。在4℃下以1000-2000g的相对离心力离心10分钟，以去除细胞和较大碎片。使用移液器小心地吸取上清液，避免扰动沉淀，转移至新的无菌离心管中。对于某些对细胞碎片敏感的实验，建议在此基础上再进行一次10000g、4℃离心10分钟。根据待测分泌成分的特性，考虑添加蛋白酶抑制剂或其他保护剂。将处理后的上清液短期保存在4℃或根据需要分装后长期保存在-20℃或-80℃冻存，并注意避免反复冻融。在进行后续检测时，应考虑细胞培养基本身的成分对实验结果的潜在影响，并设置适当的对照组。
细胞裂解物
将细胞悬液用不含钙镁离子的PBS(pH7.2-7.4)稀释至合适的细胞浓度（例如1x10^7/ml）。在冰上加入适量的组织蛋白提取试剂，轻轻混匀，裂解30分钟。然后在4℃下以12000g的相对离心力离心15分钟，以去除细胞碎片和未裂解的细胞。使用移液器小心地吸取上清液，避免扰动沉淀，转移至新的离心管中。对于蛋白检测实验，裂解液中需添加蛋白酶抑制剂。若保存过程中有沉淀形成，则再次以相同条件离心。根据待测胞内成分的特性，选择合适的保存温度和方法，例如短期保存在4℃，长期保存在-20℃或-80℃。
组织样本
将新鲜组织标本切成小块(约1-2mm³)，每克组织块加入5-10倍体积的预冷PBS(pH7.4)或其他合适的裂解液（例如RIPAbuffer，并添加蛋白酶抑制剂）。将组织块和裂解液置于冻存管中，浸入异戊烷中，然后缓慢放入液氮中进行冷冻保存。解冻时，将冻存管置于37℃水浴中快速摇晃解冻，然后立即置于冰上。使用合适的方法进行匀浆，例如手工研磨、匀浆器或高速匀浆机。先低速离心（例如1000g，5分钟，4℃）去除未匀浆的组织块和细胞碎片，然后高速离心（例如12000g，15分钟，4℃）收集上清液。将上清液分装，一部分用于立即检测，其余部分冻存于-80℃备用，避免反复冻融。
